反應(yīng)五要素:
伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 價(jià)格 |
伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Actinobacillus actinomycetemcomitansPCR | 電詢 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【標(biāo)本要求】
伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標(biāo)本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
組成及試劑配制:
1、伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
【檢驗(yàn)方法】
1.標(biāo)本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的RNA提取試劑盒處理標(biāo)本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用Trizol法提取，方法如下：取100?l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300?l裂解液（Trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700?l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.試劑配制
取n×19?l H7N9核酸熒光PCR檢測混合液與n×1?l RT-PCR酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20?l置于PCR管中，然后將樣品核酸提取液、DEPC-H2O、陽性對照品各5?l分別加入PCR管中，蓋好管蓋，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
4. PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于定量熒光PCR儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點(diǎn)熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25?l。
熒光通道檢測選擇：選用FAM通道。
血管緊張素Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體 HPLC≥98%20mg/支丹參酚酸B酯
膜粘連蛋白2受體抗體22681-72-7HPLC≥98%20mg/支丹參素
血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體67920-52-9HPLC≥98%20mg/支丹參素鈉
拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體568-73-0HPLC≥98%20mg/支丹參酮I
α-1抗胰糜蛋白酶抗體568-72-9HPLC≥98%20mg/支丹參酮IIA
α-1抗胰蛋白酶抗體 UV≥98%20mg/支丹參酮IIA-磺酸鈉
ATP結(jié)合蛋白家族6抗體96574-01-5HPLC≥98%20mg/支丹酚酸A
三磷酸腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體115939-25-8HPLC≥98%20mg/支丹酚酸B
脂聯(lián)素受體2抗體115841-09-3HPLC≥98%20mg/支丹酚酸C
ANGEL1蛋白抗體142998-47-8HPLC≥98%20mg/支丹酚酸D
伴放線放線桿菌PCR檢測試劑盒說明書1000 unitsAlw44I1000 units
4000 unitsBamHI4000 units
5x4000 unitsBamHI5x4000 units
20000 unitsBamHI, HC20000 units
10000 unitsBamHI10000 units
1000 unitsBcnI (NciI)1000 units
2000 unitsBglI2000 units
5x2000 unitsBglI5x2000 units
500 unitsBglII500 units
2500 unitsBglII2500 units
200 unitsBpu1102I (BlpI)200 units
