問(wèn)：常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些？
親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)稱(chēng)答：回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度；紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值，OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得 DNA 純度較好，如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但不表示純度低。
問(wèn)：長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？
答：親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)（5 kb 以上）時(shí)，回收效率會(huì)有所下降，這是DNA 切膠回收時(shí)的常見(jiàn)現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題：
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量；
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹(shù)脂上洗脫下來(lái)，建議洗脫兩次，可以提高洗脫效率；
3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷，如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈，切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)介紹：
DNA提取流程圖：
?公司親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列，5000余種產(chǎn)品：點(diǎn)擊了解更蛋白質(zhì)研究。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
實(shí)驗(yàn)步驟：
(1)親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
注意事項(xiàng)：
● 親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇，即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇，20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類(lèi)沒(méi)有嚴(yán)格限制，可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率，希望使用高純度的Agarose ，但沒(méi)有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液，以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間，在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收，以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率，切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小，或DNA 初始量少，回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等，不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率，請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 動(dòng)物組織β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 動(dòng)物細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)菌β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)菌β－半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 通用型組織/細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 冰凍切片衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 通用型組織/細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 冰凍切片β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 全組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 細(xì)胞β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) SiRNA大量SperfusinX脂質(zhì)體靜脈法動(dòng)物轉(zhuǎn)染試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) QuikFusin非脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
免疫測(cè)定 現(xiàn)貨供應(yīng) 小量Sperfusin脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
親和層析柱50 mL說(shuō)明書(shū)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，3T3-L1細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，BALB/3T3 clone A31細(xì)胞
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，MEF細(xì)胞
小鼠胚胎干細(xì)胞，E14細(xì)胞
小鼠胚胎干細(xì)胞，SOX1-GFP細(xì)胞
小鼠胚胎瘤細(xì)胞，ATDC5細(xì)胞
小鼠胚胎細(xì)胞，NIH/3T3細(xì)胞
小鼠前胃癌細(xì)胞，MFC細(xì)胞
