即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
?公司即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更探針標(biāo)記及檢測(cè)。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫、菌種庫等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
問:常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過對(duì)比定量的Marker 來定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問:長片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問題?
答:即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書當(dāng)DNA 段長度較長(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長段DNA 不易從樹脂上洗脫下來,建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過程中對(duì)長段DNA 的物理損傷,如混合振蕩操作不要過于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長時(shí)間暴露在紫外等下。
注意事項(xiàng):
● 即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
靈芝酸A(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganoderic acid A 81907-62-2 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品
靈芝酸 B Ganoderic acid B 81907-61-1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
靈芝醛A(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganoderal A 104700-98-3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品
膦酰二肽 Phosphoramidon disodium salt 119942-99-3 質(zhì)量規(guī)格:0.99
磷脂酶A2激活肽 Phospholipase A2 ActivatingPeptide 137314-60-4 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
磷脂酶A2 Phospholipase A2 from Crotalus adamanteus Venom 9001-81-4 質(zhì)量規(guī)格:比活性:>200U/mg,BC
磷鎢酸(>98%,BC) Sodium phosphotungstate, hydrate 51312-42-6 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
磷酸鋅四水(>98%,BR) Zinc phosphate tetrahydrate 7543-51-3 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
磷酸腺嘌呤,維生素B4 Adenine phosphate 70700-30-0 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
磷酸西他列汀一水(標(biāo)準(zhǔn)品) Sitagliptin phosphate monohydrate 654671-77-9 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
磷酸西他列汀一水 Sitagliptin phosphate monohydrate 654671-77-9 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
磷酸西他列汀 Sitagliptin Phosphate 654671-78-0 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
磷酸泰樂菌素 Tylosin phosphate 1405-53-4 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
磷酸三酯(TEP)(Standard for GC,>99.7%(GC)) Triethyl phosphate 78-40-0 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99.7%(GC)
磷酸三辛酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Tri(2-ethylhexyl)phosphate 78-42-2 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
磷酸三戊酯(>98.0%(GC)) Triamyl Phosphate 2528-38-3 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
磷酸三鉀三水(>98%,BC) Potassium phosphate, tribasic trihydrate 22763-03-7 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
磷酸三鉀 Potassium phosphate, tribasic 7778-53-2 質(zhì)量規(guī)格:>98%
磷酸三酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Trimethyl phosphate 512-56-1 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
即用型封堵液 (NC ) 50mL說明書DeuteriumOxide99.8atom%D規(guī)格:99.8原子%D
DeuteriumOxide規(guī)格:D,99.9%
DeuteriumOxide規(guī)格:D,99.9%
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DeuteriumOxide規(guī)格:D,99.9%
DeuteriumOxide規(guī)格:D,99.9%
DeuteriumChloride規(guī)格:D,99.5%DCL20%IND2O
DeuteriumChloride規(guī)格:D,99.5%DCL35%IND2O