商品介紹：

細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2C抗體  細胞外基質蛋白FREM1抗體　英文名；FREM1

細小清蛋白抗體  細胞信號轉導分子SMAD5抗體　英文名；SMAD5

纖維鞘相互作用蛋白2抗體  細胞質多聚腺苷酸結合蛋白3抗體　英文名；CPEB3

線粒體rRNA甲基轉移酶1抗體  細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑2B抗體　英文名；CDKN2B/p15 INK4b

線粒體核糖體蛋白L1抗體  細絲蛋白A抗體　英文名；Filamin A

線粒體核糖體蛋白S10抗體  纖維母細胞生長因子受體底物3抗體　英文名；FGFR substrate 3

線粒體抗病毒信號MAVS蛋白抗體  線粒體RNA聚合酶抗體　英文名；mtRNA polymerase

CD351抗體　英文名；FCAMR  突觸融合蛋白1A抗體　英文名；Syntaxin 1A(brain)

CD4重組兔單克隆抗體　英文名；CD4  突觸足蛋白抗體　英文名；Synaptopodin

CD81重組兔單克隆抗體　英文名；TAPA1/CD81  脫氧胸苷酸激酶DTYMK抗體　英文名；DTYMK

CENTB2蛋白抗體　英文名；Centaurin beta 2  外周髓鞘蛋白-22抗體　英文名；PMP22

HGC-27人胃癌細胞Complexin I/復合素1抗體　英文名；CPLX1  微管蛋白聚合促進蛋白24　英文名；TPPP

C-SKI抗體　英文名；SKI  微管相關蛋白樣蛋白3抗體　英文名；EML3

Cy5.5標記的巨噬細胞清道夫受體1抗體　英文名；MSR1 / Cy5.5  維甲酸調節(jié)核基質相關蛋白抗體　英文名；CDT2

操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉染后不利篩選細胞。

(2) 轉染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉染：把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。