ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標(biāo)本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實(shí)驗(yàn)過程中請嚴(yán)格按照使用說明操作,必能得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,可提供免費(fèi)技術(shù)咨詢服務(wù)!
產(chǎn)品名稱 | IL-27小鼠白介素27ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理 |
英文名稱 | Mouse Interleukin 27, IL-27 Elisa Kit |
貨號 | FS-M64317 |
公司“質(zhì)量是企業(yè)是生命之源”,選購優(yōu)勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優(yōu)化方案——回收利用率高、可靠性強(qiáng)
4適用于體液、組織勻漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等各種類型的樣本。
5公司產(chǎn)品僅用于科研可檢測指標(biāo)齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質(zhì)金屬蛋白酶等等
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樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
分裂周期相關(guān)蛋白3,27-Dihydroxy-20(29)-lupen-28-oic acid methyl esr別名: 分子式: C31H50O4性狀: Powder純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 駱駝蓬;羽扇豆烷;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
豬瘟病抗體5-Glutinen-3β-ol別名: Glutin-5-en-3β-ol分子式: C30H50O性狀: Powder純度: 98.5%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 霸王鞭;中藥對照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
16號染色體開放閱讀框72抗體Sculponeatic acid別名: 分子式: C30H46O4性狀: Powder純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 齊墩果烷;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
補(bǔ)體C4 γ 鏈蛋白抗體Hyptadienic acid別名: Coleonolic acid分子式: C30H46O4性狀: Powder純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 抗炎;山香;烏蘇烷;烏索烷;中藥對照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
補(bǔ)體C4d-A蛋白抗體Serranediol別名: Pinusenediol; Cathaya D分子式: C30H50O2性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 千層塔;松屬;云杉屬;中藥對照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
補(bǔ)體C4b-A蛋白抗體Alstonic acid A別名: 分子式: C30H48O3性狀: Cryst.純度: 特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
磷化整合素β2/Ingrin β2抗體Dihydroniloticin別名: 24,25-Epoxytirucall-7-ene-3,23-diol分子式: C30H50O3性狀: Powder純度: 98.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 川黃檗;甘遂烷;中藥對照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
磷化整合素β2/Ingrin β2抗體Corosolic acid別名: 分子式: C30H48O4性狀: Powder純度: 97.0%特色服務(wù): 隨貨提供1H-NMR等報告關(guān)鍵詞: 抗腫瘤;抗癌;抑制蛋白激酶C;柳蘭;烏蘇烷;烏索烷;中藥對照品;中藥標(biāo)準(zhǔn)品;植物提取物;天然產(chǎn)物;天然產(chǎn)物庫
IL-27小鼠白介素27ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理原鈣粘蛋白γA1抗體Monkey ADIPOR2 (Adiponectin Receptor 2) ELISA Kit
G蛋白偶聯(lián)受體70抗體Monkey TM (Thrombomodulin ) ELISA Kit
G蛋白偶聯(lián)受體71抗體Monkey PP (Pancreatic Polypeptide) ELISA Kit
谷氨受體δ2/GluR-δ2抗體Monkey NUP98 (Nucleoporin 98kDa) ELISA Kit
血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體Monkey GA (Glycated Albumin) ELISA Kit
谷氨脫羧酶67抗體Monkey PI3K2α (Phosphoinositide-3-Kinase Class-2-Alpha Polypeptide) ELISA Kit
生長抑制DNA損傷基因45抗體Monkey ATGA/TGAB (Anti-Thyroid-Globulin Antibody) ELISA Kit
胃泌素抑制肽抗體Monkey CTX-II (Cross Linked C-opeptide of Type II Collagen) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)