實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
犬巨球菌熒光定量PCR試劑盒探針法 | Macrococcus canis | 多種規(guī)格 | BJ-P9757 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 ４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
STING激動劑(STING agonist-1)STING agonist-11mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
HIV integrase抑制劑（Elvitegravir）Elvitegravir1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
HCV NS5A抑制劑(Daclatasvir)Daclatasvir1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
HIV-1整合酶抑制劑(Dolutegravir)Dolutegravir1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
丙型肝炎病毒NS3/4a蛋白酶抑制劑(MK-5172)MK-51721mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
3CLpro抑制劑(GC376)GC3761mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg
HCV NS3/4A protease抑制劑（Simeprevir）Simeprevir1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
β-lactamase抑制劑（Avibactam sodium）Avibactam sodium1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
SAPKs/JNKs激活劑(Anisomycin)Anisomycin1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
influenza A和B病毒神經(jīng)酶抑制劑（Oseltamivir acid）Oseltamivir acid1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
犬巨球菌熒光定量PCR試劑盒探針法人 PDE4B / DPDE4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白刀豆蛋白A（ConA）樹脂法純化試劑盒 5次
人 GRK6 / GPRK6 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白麥芽凝集素（WGA）樹脂法純化試劑盒 5次
人 DYRK3 / REDK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白氨基苯硼酸（APA）樹脂法純化試劑盒 5次
人 STXBP1 / UNC18A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白解法N-糖基分解試劑盒 20次
人 GRK2 / ADRBK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白解法O-糖基分解試劑盒 20次
人 MAP4K2 / GC Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白解法*糖基分解試劑盒 20次
人 PDE1B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白化學法*糖基分解試劑盒 20次
人 CSK / C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白解法非N非O糖基磷脂酰肌醇（GPI） 20次
人 TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)分解試劑盒
人 PAD4 / PADI4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物糖蛋白電泳遷移檢測試劑盒 5次
人 MAP4K5 / MEKKK5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)動物細胞糖蛋白高碘酸希爾（PAS）法 50次
