實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
節(jié)狀古柏線蟲PCR熒光定量檢測試劑盒 | Cooperia oncophoraPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6609 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
1瓶 CBRH-7919株 CBRH-7919 低溫運輸和保存 6.25-400pg/mL 人YY肽3(PYY3) ELISA試劑盒
1瓶 AGS株 AGS 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人轉(zhuǎn)錄因子RelB蛋白ELISA試劑盒
2 ug pHCMC04 pHCMC04 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人環(huán)腺苷特異性二酯4B(PDE-4B)ELISA試劑盒
2 ug pSIREN-RetroQ-ZsGreen pSIREN-RetroQ-ZsGreen 低溫運輸,-20℃保存 62.5-4000 pg/mL β(β-CG)ELISA試劑盒
250g 聚乙二醇 8000 PEG8000 室溫保存 0.78-50 ng/mL 人卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)ELISA試劑盒
1 管 Rosetta-gamiB(DE3)plysS大腸桿菌 Rosetta-gami B(DE3)plysS E.coli Strain -80℃保存 0.312-20 ng/mL 人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白8 (LRP-8) ELISA試劑盒
50次 蛋白膠微量回收試劑盒 Protein Gel Mini-Extraction Kit 4℃保存(離心管專用離心研磨杵可以常溫保存)水平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)Water Plate Count Agar用于飼料中細菌總數(shù)測定250
50T 綿羊痘病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Lipoprotein lipase
25mL Agarose Gel Loading Buffer-Glycero (甘油型上樣液),6X Agarose Gel Loading Buffer-Glycero ,6X 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Baculoviral IAP repeat-containing protein 6
5mL 角質(zhì)生長因子-不含BPE Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Glial fibrillary acidic protein
5mL 腦膜生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Kallikrein-10
節(jié)狀古柏線蟲PCR熒光定量檢測試劑盒阿奇檢定培養(yǎng)基 英文名稱:Azithromycin Test Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
人乙酰受體抗體(AChRab)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人趨化因子2(CXCL2)免疫試劑盒進口、組裝
人抗sp100抗體(sp100)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人60S核糖體蛋白L17(RPL17)免疫試劑盒進口、組裝
綿羊雌二醇(E2)免疫試劑盒進口、分裝
大鼠血小板生成素(TPO)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
pH7.3PBS緩沖液 英文名稱:PBS 產(chǎn)品規(guī)格:250g
改良馬丁液體培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250ml*20瓶