實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
嗜人錐蠅PCR熒光定量檢測試劑盒 | Cochliomyia hominivoraxPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6603 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH8.2 Tris-HCl Buffer,1.0M,pH8.2 常溫保存乙酰胺紅瓊脂進口、國產Acetamide Agar250克測定綠膿桿菌色素分離、培養(yǎng)
大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養(yǎng)基平板9cm TSA 10個/包 0.312-20 ng/mL 人血管緊張素轉化(ACE)ELISA試劑盒
2 ug pMXB10 pMXB10 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 甲型流感病毒H1亞型(IAV-H1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
250mL Beta-ME-EDTA Solution(beta-EDTA溶液) Beta-ME-EDTA Solution 常溫保存 0.78-50 ng/mL 人胰島再生源蛋白3 - alpha(REG-3-alpha)ELISA試劑盒
50T 兔黏液瘤病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL (Cortisol)ELISA試劑盒
1g 纖維素 Cellulase From Aspergillus Niger 4℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human C-C motif chemokine 27
2 ug pBiFC-bFosVC155 pBiFC-bFosVC155 低溫運輸,-20℃保存牛心浸粉進口、國產Beef Heart Infusion培養(yǎng)基原材料,提供豐富的營養(yǎng)成份100
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.4 MOPS Buffer,1.0M,pH7.4 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Early growth response protein 1
50T 大腸桿菌(O1)PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
250mL Dialysis Tubing Wash Buffer(透析袋洗滌液),5X Dialysis Tubing Wash Buffer,5X 常溫保存 3.12-200 ng/mL 山羊痘(GPV)核酸檢測試劑盒
5次 PCR法DNA探針辛標記試劑盒 PCR DNA Labeling Kit Series -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人催乳素(PRL)ELISA試劑盒
嗜人錐蠅PCR熒光定量檢測試劑盒沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)(2015藥典) 英文名稱:Sabouraud Dextrose Agar 產品規(guī)格:250g
緩沖動力-硝酸鹽培養(yǎng)基 英文名稱:Buffered Power - nitrate medium 產品規(guī)格:250g
豬骨成型蛋白7(BMP7)免疫試劑盒進口、組裝
小鼠葡萄糖激(GCK)免疫試劑盒進口、分裝
小鼠白介素13(IL-13)免疫試劑盒進口、分裝
人乙酰輔A羧化合成(ACC)免疫試劑盒*直銷
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