實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
牛捻轉(zhuǎn)胃蟲PCR熒光定量檢測試劑盒 | Mecistocirrus digitatusPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6969 |
實(shí)驗(yàn)外包:
1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測：Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項(xiàng) １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
50T 登革熱病毒Ⅰ型PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1瓶 15P-1株 15P-1 低溫運(yùn)輸和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Apelin-13
100次 菌 PCR Mix 6（RPB2） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
哥倫比亞CNA瓊脂基礎(chǔ) Columbia CNA Agar Base 250gm-TEC瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)m-TEC Agar用于水中耐熱細(xì)菌濾膜計(jì)數(shù)(Acumedia方法)250
50次 柱式真菌RNAout Column Fungal RNAOUT 4℃保存 78-5000 pg/mL 人橋粒芯糖蛋白2(DSG2)ELISA試劑盒
液體菌種保存管（副溶）（不含瓷珠） 1.4ml*50支 0.312-20 ng/mL 人可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒
SCDLP液體培養(yǎng)基 Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth 250g 78-5000 pg/mL 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA試劑盒
1瓶 PA12株 PA12 低溫運(yùn)輸和保存
解磷細(xì)菌培養(yǎng)基 Norganic Phosphorus Bacteria 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Suppressor of cytokine signaling 1
100次 古細(xì)菌+真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3（rDNA） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人粘附分子3(Cell adhesion molecule 3)ELISA試劑盒
l mg Z-VAD-FMK（Caspase Inhibitor） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存Campy-Cefex 瓊脂基礎(chǔ)進(jìn)口、國產(chǎn)Campy-Cefex Agar Base用于彎曲桿菌分離培養(yǎng)(FDA方法)250
牛捻轉(zhuǎn)胃蟲PCR熒光定量檢測試劑盒PF-670462 CK1ε抑制劑(PF-670462) 1mL(10mM)|10mg|50mg
Ro3280 PLK1抑制劑(Ro3280) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
TTNPB RAR激動(dòng)劑(TTNPB) 1mL(10mM)|10mg|50mg
Ezatiostat GSTP1-1抑制劑（Ezatiostat） 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
chroman 1 ROCK II抑制劑（chroman 1） 1mL(10mM)|5mg|10mg
BMS-690514 EGFR和VEGFR抑制劑(BMS-690514) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
CCT128930 Akt2抑制劑(CCT128930) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
PS48 PDK1激動(dòng)劑(PS48) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
AT7867 Akt1/Akt2/Akt3和p70S6K/PKA抑制劑（AT7867） 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
SU11274 Met抑制劑(SU11274) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
NVP-BKM120 Hydrochloride 泛class IPI3K抑制劑（NVP-BKM120 Hydrochloride） 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
