實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
糞腸球菌PCR熒光定量檢測試劑盒 | Enterococcus faecalis PCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6703 |
特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 １．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 ４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
100 mg MEQ，（6-甲氧-N-乙基） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.78-50 ng/mL 人水通道蛋白2(AQP-2)ELISA試劑盒
2 ug pGL3- enhancer pGL3- enhancer 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/ml 人組織蛋白C（CTS-C）ELISA試劑盒
500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin-associated protein 2
尿素 20支 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Growth/differentiation factor 2
2 ug pBAD18 pBAD18 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Multidrug resistance-associated protein 6
100g 聚乙烯吡咯烷酮 K360 Polyvinylpyrrolidone(PVP K360) 室溫保存 0.312-20 ng/mL 人鈣調(diào)素(RC)ELISA試劑盒
1.5mL DNA尿素-PAGE上樣液 DNA Urea-PAGE Loading Buffer -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Kallikrein-6
25uL Cy5-dCTP溶液 (10 mM) Cy5-dCTP Solution -20℃保存
10mL 氨芐溶液,50mg/mL Ampicillin Solution -20℃保存 312-20000 pg/mL ELISA Kit for Human Pikachurin
2 ug pLVX-mCherry-N1 pLVX-mCherry-N1 低溫運輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Protransforming growth factor alpha
七葉苷培養(yǎng)基 Esculin Medium 10 15.6-1000 pg/mL 人輔Q結(jié)合蛋白COQ10同系物B(CQ10B)ELISA試劑盒
糞腸球菌PCR熒光定量檢測試劑盒擬人參皂苷-Rh2標準品分子式：C36H62O8 英文名：3-O-β-D-glucopyranosyl-3β,12β,25-trihydroxyldammar-(E)-20(22)-ene 分子量： 號：1370264-16-6 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
老鸛草素標準品分子式：C41H28O27 英文名：Geraniin 分子量：952.64 號：60976-49-0 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
槲皮苷標準品分子式：C21H20O11 英文名： Quercitrin 分子量：448.38 號：522-12-3 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷標準品分子式： C33H40C22 英文名： Quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden 分子量： 788.21 號： 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
槲皮素標準品分子式：C15H10O7 英文名：Quercetin 分子量：302.24 號：117-39-5 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
虎杖苷標準品分子式：C20H22O8 英文名：Polydatin 分子量：390.38 號：27208-80-6 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī) 格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
花椒毒酚標準品分子式： C11H6O4 英文名：Xanthotol 分子量： 202.16 號： 2009-24-7 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
花椒毒素標準品分子式： C12H8O4 英文名：8-Methoxypsoralen 分子量： 216.19 號： 298-81-7 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
花旗松素標準品分子式：C15H12O7 英文名： Taxifolin 分子量：304.25 號：480-18-2 檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98% 規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶需求包裝)
