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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96662 |
商品屬性：
名稱 OKT 11 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD2)) 種屬小鼠 年齡（性別）不詳 組織來源小鼠B淋巴細胞，小鼠淋巴瘤細胞 生長特性懸浮細胞 細胞形態(tài)淋巴母細胞樣 背景描述OKT 11細胞是一株用人的T細胞白血病細胞(急性淋巴細胞白血病)對小鼠進行免疫，然后將免疫的小鼠脾細胞與P3X63Ag8.U1骨髓瘤細胞融合而建立的細胞系。免疫球蛋白；單克隆抗體；抗人T細胞(人T淋巴細胞)和人E玫瑰花環(huán)反應(yīng)陽性胸腺細胞(人胸腺淋巴細胞)；抗CD2。 生長培養(yǎng)基IMDM＋20% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 注意事項該細胞為懸浮細胞，請注意離心收集細胞懸液；請勿直接倒掉細胞培養(yǎng)液。 |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 CHO細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H7N9 (A/Zhejiang/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IL18R1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 IGFBP5 / IGFBP-5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EphB6 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5
OKT 11 (小鼠雜交瘤細胞(抗CD2))100µg 人基因組DNA混合液 Human Genomic DNA Mix 4℃保存 3.12-200 pg/mL ELISA Kit for Human Neurofilament heavy polypeptide
1mL 組織培養(yǎng)基蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Tissue Culture -20℃保存
100mL TABS Buffer,0.2M,pH8.0 TABS Buffer,0.2M,pH8.0 常溫保存 0.156-10 ng/mL 睪酮(T)ELISA試劑盒
制備培養(yǎng)基
1盒 無內(nèi)毒素槍頭，1 mL GC瓊脂進口、國產(chǎn)GC Agar用于淋球菌的分離培養(yǎng)(OXOID方法)250
50mL 動物裂解液B（變性） Animal Cell Lysis Solution 4℃保存雙歧桿菌BS培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)250
5次 大提柱式Ti質(zhì)粒DNAout 78-5000 pg/mL 人髓系觸發(fā)受體2(TREM2)ELISA試劑盒
50次 膠回收及PCR片段純化兩用試劑盒 DNABACK & PCR Clean-Up Kit 常溫保存 1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Thyroid hormone receptor alpha
2 ug pSH63 pSH63 低溫運輸，-20℃保存乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)Lactose Ferment Broth250克用于大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌的測定
含225ml生理鹽水均質(zhì)袋 Physiological Saline 10個/包 78-5000 pg/mL 人神經(jīng)介素U(NMU)ELISA試劑盒
1000mL Citrate Buffered Saline or SSC,20X,pH7.0 Citrate Buffered Saline or SSC,20X,pH7.0 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人蛋白二硫鍵異構(gòu)(PDI)ELISA試劑盒
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
