實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
丙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測試劑盒 | Hepatitis C Virus(HCV)RTPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6839 |
特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲存條件：-20℃以下，有效期12個月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項(xiàng) １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
100U Klenow 片段 15.6-1000 pg/mL 人半蛋白抑制劑B(CSTB)ELISA試劑盒
250U KOD DNA聚合 KOD DNA Polymerase -20℃保存 0.625-40 ng/mL 人巨噬刺激蛋白MSTP9(Putative macrophage-stimulating protein MSTP9)ELISA試劑盒
1瓶 BC3H1株 BC3H1 低溫運(yùn)輸和保存碘附進(jìn)口、國產(chǎn)Iodophor500克炭疽桿菌檢測用配套試劑
50T 流行性腦膜炎雙球菌PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人甘露糖結(jié)合蛋白C(MBP-C)ELISA試劑盒
250mL NP40 Lysis Buffer（NP40裂解液） NP40 Lysis Buffer 常溫保存 46.9-3000 pg/mL ELISA Kit for Human Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10
肉湯培養(yǎng)基A Broth medium A(Casein soya bean digest broth) 250g
2 ug pMET C pMET C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Dopamine
250mL MES Buffer,1.0M,pH6.5 MES Buffer,1.0M,pH6.5 常溫保存PEA 瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)PEA Agar用于從含革蘭氏陰性菌的標(biāo)本中分離培養(yǎng)革蘭氏陽性菌250g
2 ug pcDNA3.1（hyg）+ pcDNA3.1（hyg）+ 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Malignant T cell-amplified sequence 1
2 ug pCMV-HA-N pCMV-HA-N 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
瑞氏染色液 5ml*8 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Coactosin-like protein
丙型肝炎病毒PCR熒光定量檢測試劑盒Masson Staining Kit Masson三色染色試劑盒 6×100mL
Giemsa Staining Solution 姬姆薩染色液(吉姆薩染液) 250mL
Tar purple Staining Solution 0.5%焦油紫染色液 50mL
Hematoxylin Staining Solution (Gill法) 15mL
Modified Bielschowsky nerve Staining Kit Bielschowsky改良法神經(jīng)組織染色試劑盒 5×50mL
Enhanced Sirius Red Straining Kit 改良型天狼猩紅染色試劑盒 100mL
Glycogen PAS stain (for fungi) 糖原PAS染色液(真菌專用) 3×50mL
Methyl Green Staining Solution 甲基綠染色液 100ml
Nissl Staining Solution 尼氏染色液(Nissl染色液) 100ml
Methyl Green-Pyronin Staining Solution 甲基綠-派洛寧染色液(MGP染色液) 100ml
Lactic Acid Phenol Cotton Blue Staining Solution 棉藍(lán)乳酚油染色液 250mL
