細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96834 |
商品屬性：
名稱 MPC-83 (小鼠胰腺腺泡細胞) 生長特性貼壁細胞 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
大鼠 ACE2 / ACEH 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 EPHB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 LBP / Lipopolysaccharide Binding 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 ILKAP 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 GOLM1 / GP73 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 TCN2 / Transco
MPC-83 (小鼠胰腺腺泡細胞)250mL Sodium Carbonate Solution（鈉溶液）,0.5M,pH10 Sodium Carbonate Solution,0.5M,pH10 常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin-like protein ATG12
1 管 XL blue大腸桿菌 XL1-Blue E.coli Strain -80℃保存 15.6-1000 pg/mL 人癌胚抗原粘附分子(CEACAM1)ELISA試劑盒
50T 人E-選擇素S128R基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP) 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Low-density lipoprotein receptor-related protein 5
1瓶 RH-35株 RH-35 低溫運輸和保存 0.78-50 ng/mL 人膜聯蛋白A6(ANXA6)ELISA試劑盒
50T 甲、乙型流感病毒2聯PCR測定試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
250mL RNase-Free SSC（無RNase的SSC）,20X RNase-Free SSC,20X 常溫保存
結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA） Violet Red Bile Agar 250gHalf Fraser添加劑進口、國產Half Fraser Supplement10毫升添加到HB4190中，用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
100次 真菌種屬鑒定 PCR Mix 4（SSU） Fungal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 3.12-200 pg/mL ELISA Kit for Thromboxane A2
1個 0.5mLDNA超濾離心管(300-500KD) 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Protein CYR61
5g L- 羥基 L-Hydroxyproline 室溫干燥保存 15.6-1000 pg/mL 人過氧化氫(CAT)ELISA試劑盒
TB培養(yǎng)基 TB Medium 250g 0.156-10 ng/mL 人雙調蛋白(AREG)ELISA試劑盒
