細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96688 |
商品屬性：
名稱 J774A.1 (小鼠單核巨噬細胞) 別稱J-774A.1; J774.A1; J774 A1; J774A.1; J 774A.1; J774 A.1 種屬小鼠 年齡（性別）成年 組織來源巨噬細胞 生長特性貼壁細胞，不用消化 細胞形態(tài)單核細胞、巨噬細胞樣 背景描述J774A.1細胞來源于BABL/cN小鼠，有抗體依賴的吞噬作用，生長受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1細胞可產(chǎn)生IL-1β和大量的。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~17小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 受體表達情況Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed 注意事項1、該細胞不建議使用消化，會刺激分化； 2、 超過3天不傳代細胞容易分化； 3、 培養(yǎng)時，存在少量分化細胞，屬于正常現(xiàn)象。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
人 ENTPD5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 XCL1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CSK / C-Src kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SPG21 / ACP33 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 MKK6 / MEK6 / MAP2K6 (207 Ser/Asp, 211 Thr/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 IL5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對
J774A.1 (小鼠單核巨噬細胞)50T 軍團桿菌PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人/富有剪接因子1(SRSF1)ELISA試劑盒
30次 DNA 修復混合液 DNA Repair Mix -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Nephrin
1瓶 CL-187[LS180]株 CL-187[LS180] 低溫運輸和保存
5次 超快核酸轉膜試劑盒A（硝酸纖維素膜） Rapid Nucleic Acid Blotting Kit 常溫 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Prokineticin-1
2 ug pLP VSV-G pLP VSV-G 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人膜裂解抑制物(MIRL/CD59)ELISA試劑盒
250mL HPB 5X (High Phosphate Buffer) HPB 5X (High Phosphate Buffer) 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人卷曲蛋白3(Fz-3)ELISA試劑盒
2 ug pEGFP1- C1 pEGFP1- C1 低溫運輸，-20℃保存
100次 植物DNAout Plant DNAOUT 常溫 1.56-100 ng/mL 人臂板蛋白-4D(SM/SEMA-4D)ELISA試劑盒
李氏增菌肉湯LB2 Listeria Enrichment Broth 10ml*20支/包 1.56-100 ng/mL 人血紅蛋白α亞基(Hemoglobin subunit alpha)ELISA試劑盒
1g γ- 球蛋白 ( 牛血 ) γ-Globulins From Bovine Blood -20℃保存大腸桿菌顯色培養(yǎng)基進口、國產(chǎn)E.Coli Chromogenic Medium用于快速、準確檢測大腸桿菌大腸桿菌培養(yǎng)24小時，顯蘭色1000ml
10mL Sephacryl S-400基質 Sephacryl S-400 4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Hornerin
