操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
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產品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X96606 |
商品屬性：
名稱 MA-891 (小鼠乳腺癌高轉移細胞) 組織來源乳腺 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠 CD163 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 ALK-2 / ACVR1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 EIF4B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 UCHL1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 UCHL3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
人 HAX1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽
人 NT5E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
人 ADRA1A 轉錄變體1 基因全長O
MA-891 (小鼠乳腺癌高轉移細胞)1瓶 NCTC 1469 [NCTC1469]株 NCTC 1469 [NCTC1469] 低溫運輸和保存 0.156-10 ng/mL 人腎素受體(Renin receptor)ELISA試劑盒
1.5mL IPTG溶液 IPTG Solution -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人干擾素α/β受體(IFNα/βR1)ELISA試劑盒
2 ug pGBKlam pGBKlam 低溫運輸，-20℃保存
50T 副豬嗜血桿菌定量PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人驅動蛋白家族成員5A(KIF5A)ELISA試劑盒
500mL Blotto-Antifoam in TBS with azide Blotto-Antifoam in TBS with azide 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人骨髓蛋白多糖(PRG2)ELISA試劑盒
100 mg Calcein M Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒
胰化大豆堅固綠瓊脂 250g 0.78-50 ng/mL 人內凝集蛋白-1（ITLN-1）ELISA試劑盒
1 管 XL-10 gold大腸桿菌 XL-10 gold E.coli Strain -80℃保存克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基進口、國產Christensen Citrate Medium250克腸桿菌鑒別
肉湯 20支 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Baculoviral IAP repeat-containing protein 1
50T 玉米BT176 PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存 1.56-100 nmol/L ELISA Kit for Thyroxine
150U 半乳糖氧化 Galactose Oxidase -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 口蹄疫病毒A亞型(FMDV-A)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
