實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
嗜冷黃桿菌PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒 | Flavobacterium psychrophilumPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6757 |
特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專(zhuān)一性引物，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件：-20℃以下，有效期12個(gè)月。
二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 | 三、注意事項(xiàng) １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 ２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
|
操作流程
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）（2015藥典） TSB 250g 1.56-100 ng/mL 人DNA拓?fù)洚悩?gòu)1(DNA topoisomerase 1)ELISA試劑盒
營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（中國(guó)藥典） 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human UPF0556 protein C19orf10
3%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基 3% NaCl MR-VP Medium 20支炭疽桿菌沉淀血清進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)炭疽桿菌檢測(cè)用配套試劑1ml
3%氯化鈉堿性蛋白胨水顆粒 3%NaCl Alkaline Peptone Water 225ml/袋*10 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Beta-defensin 114
1瓶 Bel-7404株 Bel-7404 低溫運(yùn)輸和保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cytochrome c oxidase subunit 5A, mitochondrial
2 ug pcDNA3.1/Zeo（+） pcDNA3.1/Zeo（+） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Endoplasmin
1瓶 EC-304株 EC-304 低溫運(yùn)輸和保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human DNA ligase 3
煌綠瓊脂培養(yǎng)基 Brilliant Green Agar Medium 250g 0.312-20 ng/mL 人水通道蛋白9(AQP9)ELISA試劑盒
1瓶 CNE株 CNE 低溫運(yùn)輸和保存KORSER氏檸檬酸鹽肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Korser Citrate Sodium Broth100克用于細(xì)菌的枸櫞酸鹽試驗(yàn)
2 ug pLOX-CW-CRE pLOX-CW-CRE 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人硫酸乙酰肝素蛋白聚糖/串珠素(HSPG)ELISA試劑盒
250mg 直鏈淀粉 Amylose 室溫干燥保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Histone H4
嗜冷黃桿菌PCR熒光定量檢測(cè)試劑盒紫草素標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C16H16O5英文名： shikonin分子量： 288.31號(hào)： 517-88-4檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫草酸標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C27H22O12英文名： Lithospermic acid分子量： 538.46號(hào)： 28831-65-4檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C17H24O9英文名： Syringin分子量： 372.37號(hào)： 118-34-3檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫堇靈標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C21H21NO5英文名： Corynoline分子量： 367.40號(hào)： 18797-79-0檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫萁酮標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C10H10O3英文名： Osmundacetone分子量： 178號(hào)： 檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫菀酮標(biāo)準(zhǔn)品分子式：C30H50O英文名：Shionone分子量：426.72號(hào)：10376-48-4檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
紫云英苷標(biāo)準(zhǔn)品分子式：C21H20O11英文名：Astragalin分子量：448.38 號(hào)：480-10-4 檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
醉魚(yú)草皂苷 Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C48H78O18英文名： buddlejasaponin IV分子量： 942號(hào)： 檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：20mg 50mg 100mg 500mg 1g (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
蛇床子素標(biāo)準(zhǔn)品分子式： C15H16O3英文名： Osthole分子量： 244.29號(hào)： 484-12-8檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%規(guī)格：1kg 5kg (可根據(jù)客戶(hù)需求包裝)
