細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X96952 |
商品屬性：
名稱 NCI-H1563 (胚肺細(xì)胞) 種屬人類 年齡（性別）不詳 組織來源肺 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維樣 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:5 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
人 COMP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNTN5 / Contactin-5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNTN3 / Contactin-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNTN3 / Contactin-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNTN2 / Contactin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNTN1 / Contactin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
人 CNDP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變
NCI-H1563 (胚肺細(xì)胞) 1g 硫酸卡那 Kanamycin Sulfate 室溫保存
5g 代乙酰胺 Iodoacetamide 4℃保存
2 ug pGEX-4T- 3 pGEX-4T- 3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人β微精原蛋白（Beta-microseminoprotein/PRSP）ELISA試劑盒
5次 大提柱式細(xì)菌RNAout Maxi Column Bacterial RNAOUT 4℃保存 15.6-1000 pg/mL 人白介素21(IL-21)ELISA試劑盒
胰蛋白胨大豆肉湯顆粒 Tryptose Soya Broth 250g
2 ug pYCP50 pYCP50 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human C-C chemokine receptor type 6
BSSA培養(yǎng)基 BSSA Medium 250g液體改良馬丁培養(yǎng)基(含瓊脂)進(jìn)口、國產(chǎn)Martin Broth,Modified(Flour)250克生物制品真菌無菌檢驗(yàn)
1瓶 CGM1株 CGM1 低溫運(yùn)輸和保存 0.312-20 ng/mL 人多巴胺β-羥化ELISA試劑盒
1 管 Novablue(DE3)大腸桿菌 Novablue(DE3) E.coli Strain -80℃保存TTC-吐溫80-營養(yǎng)瓊脂 進(jìn)口、國產(chǎn)TTC Lecithin Tween80 Nutrient Agar用于化妝品中細(xì)菌總數(shù)測(cè)定（GB標(biāo)準(zhǔn)）250
125mL Phosphate Buffered RIPA，2X Phosphate Buffered RIPA，2X 常溫保存 0.156-10 ng/mL 人衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)ELISA試劑盒
10mL DNA上樣液 (紅色),6×（非甘油） DNAON 4℃保存 0.156-10 ng/mL 人尿素通道蛋白1(Urea transporter 1)ELISA試劑盒
