選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/24樣 |
檢測(cè)方法 | 可見(jiàn)分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6628 |
商品介紹:
測(cè)定意義
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,屬于蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。
測(cè)定原理:
在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成;在堿性條件下,還原磷鉬酸生成鎢藍(lán);鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,測(cè)定680nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
Bacillus firmus色素P450氧化檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.色素B5氧化檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.中性蔗糖轉(zhuǎn)化檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.6-蔗糖合成檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.β-香樹(shù)脂合檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.1-3-β-D葡聚糖檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.α酮戊二酸檢測(cè)試劑盒
Bacillus sp.脂肪酸檢測(cè)試劑盒
堿性蛋白酶可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)試劑盒染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)Anti-Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 化絲裂原活化蛋白激激8抗體人血紅蛋白H(HbH)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
吉馬酮 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%Anti-Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290) 化絲裂原活化蛋白激激8抗體人血紅蛋白β(HBβ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
龍膽苦苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-MATH1 腸道分化干MATH-1蛋白抗體人血紅素氧化1(HO1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銀杏內(nèi)酯 J 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%Anti-Morphine 單克隆抗體人血紅素氧化2(HO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銀杏(C15:1) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%Anti-Morphine 抗體人血漿抗凝蛋白C(PC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
銀杏(C13:0) 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% Anti-Morphine 抗體人血漿抗凝蛋白S(PS)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥95%Anti-Torc2/Crtc2 CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體人血漿硒蛋白P(SEPP1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
石杉?jí)A乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%Anti-Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171) 化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體人血凝素(HA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
鹽去氫駱駝蓬堿 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Morphine 單克隆抗體人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激2(SGK2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異鼠李素 90%Anti-Amphetamine 單克隆抗體()人白蛋白(ALB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異鼠李素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%(HPLC)Anti-MEK1/2(MAPKK1) 絲裂原活化蛋白激激1抗體人血清淀粉樣蛋白A(SAA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異鼠李素 >98%(HPLC)Anti-MEK2/MAPKK2 絲裂原活化蛋白激激2抗體人信號(hào)素4C (SEMA4C)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
歐前胡素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-MAPKAP Kinase 2 絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體人紅補(bǔ)體受體1 (CR1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異阿魏 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr222) 化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體人脂球因子8 (MFG-E8)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
異佛手柑內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Anti-Phospho-MAPKAPK2 (Thr334) 化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體人血清素轉(zhuǎn)運(yùn)體(SERT)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒