實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
口蹄疫病毒亞型PCR熒光定量檢測試劑盒 | FootandMouth Disease Virus(FMDV)Asia1RTPCR | 多種規(guī)格 | BJ-P6763 |
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
1瓶 TE671 subline 2株 TE671 subline 2 低溫運輸和保存 0.312-20 ng/mL. 人糖和SH3結(jié)構(gòu)域包含蛋白1(SORBS1)ELISA試劑盒
血液瓊脂基礎 Blood agar base 250g 7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human Membrane primary amine oxidase
250g 糊精 Dextrin 室溫干燥避光保存
200 mL 小鼠胰島分離液1.072 Cell Separation Solution -20℃保存 15.6-1000 U/L 人胞外超氧化物歧化(SOD3)ELISA試劑盒
2 ug pSV-beta-gal pSV-beta-gal 低溫運輸,-20℃保存
3%NaCl 20支 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Eukaryotic translation initiation factor 2-alpha kinase 3
100mL Kinase Buffer II,5X Kinase Buffer II,5X 常溫保存
2 ug pLNCX2 pLNCX2 低溫運輸,-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3
25g L- 鹽酸鹽 L-Arginine HCl 室溫保存 0.156-10 ng/mL 轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸檢測試劑盒
1.5mL 溴化乙錠溶液,10 mg/mL Ethidium Bromide Solution 4℃避光 62.5-4000 pg/mL 人半乳糖凝集素3(Galectin-3)ELISA試劑盒
50T 登革熱病毒Ⅰ、Ⅱ型分型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 6.25-400 ng/mL ELISA Kit for Human Hemoglobin subunit gamma-1
口蹄疫病毒亞型PCR熒光定量檢測試劑盒北美芹素標準品登錄號: 13161-75-6 英文別名: (Z)-2-Methyl-2-butenoic acid [(9R)-9-acetoxy-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-10α-yl] ester 分子式: C21H22O7 分子量: 386.398 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 淺黃色固體
紫草酸標準品登錄號: 28831-65-4 英文別名: 4-{(E)-2-[1-Carboxy-2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-ethoxycarbonyl]-vinyl}-2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-hydroxy-2,3-dihydro-benzofuran-3-carboxylic acid 分子式: C27H22O12 分子量: 538.459 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 淺黃色粉末
靈芝酸A標準品登錄號: 81907-62-2 英文別名: (25R)-7β,15α-Dihydroxy-3,11,23-trioxo-5α-lanost-8-en-26-oic aci 分子式: C30H42O7 分子量: 514.65 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色結(jié)晶
3-O-D-葡萄糖(1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羥基羽扇豆20(29)-烯-28–酸標準品登錄號: 848784-85-0 英文名: 23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-O-b-D-glucopyranosyl(1→4)[-L-rhamnopyranosyl) (1→2)--L-arabinopyranoside] 分子式: C47H76O17 分子量: 912 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體
3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷標準品登錄號: 68027-14-5 英文名: 3-O-D-glucopyranosyl( 1→4)- [ L-rhamnopyranosyl(1→2)]-L-arabinopyranosyl 23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid – 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside 分子式: C65H106O31 分子量: 1382 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體
3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羥基羽扇豆20(29)-烯-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷標準品登錄號: 366814-43-9 英文名: 3-O-D-glucopyranosyl( 1→3)-L-rhamnopyranosyl(1→2)-L-arabinopyranosyl lupinic acid– 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside 分子式: C65H106O30 分子量: 1366 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體
Hederacolchiside E標準品分子式: C65H106O30 登錄號: 33783-82-3 分子量: 1366 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體 規(guī)格: 5mg/支
4補充中2標準品分子式: C47H76O17 登錄號: 68027-15-6 分子量: 912 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體 規(guī)格: 5mg/支
4補充中3標準品分子式: C47H76O16 登錄號: 848784-87-2 分子量: 896 分子結(jié)構(gòu): 外觀: 白色晶體 規(guī)格: 5 mg/支