服務流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
非凍型唾液DNA保存液 | 250 mL | YS-P013259 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
人XIV型膠原 (COL14)度他雄(標準品)磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
人III型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTX-III) 依達拉奉磷酸化自噬相關蛋白4C抗體
人EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成酶抗體(EJ/GlyRS) 依達拉奉(標準品)磷酸化自噬相關蛋白7抗體
人肝配蛋白A1 (EFNA1)氫化奎寧定;雙氫奎尼丁磷酸化自噬相關蛋白16A抗體
人E選擇素(SELE) 鹽酸依匹斯汀磷酸化自噬相關蛋白9A抗體
人F-框蛋白2(FBXO2) 鹽酸依匹斯汀(標準品)磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
人FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3) 依普利酮磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
人GATA結合蛋白1(GATA1)依普利酮(標準品)磷酸化腫瘤血管內(nèi)皮標志物8抗體
人GATA結合蛋白2(GATA2)戊酸雌二磷酸化自噬相關蛋白4A抗體
人GATA結合蛋白3(GATA3)戊酸雌二磷酸化自噬相關蛋白4C抗體
人GATA結合蛋白4(GATA4)依替膦酸鈉磷酸化自噬相關蛋白16A抗體
人GATA結合蛋白5(GATA5)度酸磷酸化蛋白激酶AKT3抗體
人GDP解離抑制因子1(GDI1)度酸(標準品)磷酸化腎上腺素能受體β2抗體
人GTP酶活化蛋白(GAP) 孕烯磷酸化水通道蛋白2抗體
人G蛋白β1(GNβ1)依維莫司磷酸化自噬相關蛋白3抗體
人G蛋白信號調(diào)節(jié)蛋白4(RGS4)醋酸氟輕松;醋酸膚輕松縮酶2抗體
非凍型唾液DNA保存液Calcineurin A/PP-2B alpha 1 鈣調(diào)磷酸酶抗體3-甲氧基苯磺酰氯 96%
Caldesmon 鈣介質(zhì)素抗體棕櫚酸甲酯 分析標準品,≥99.0% (GC)
phosphor-Caldesmon(Ser789) 磷酸化鈣介質(zhì)素抗體6-甲基喹啉 98%
Calpain 1 鈣蛋白酶1抗體9-甲基蒽 分析標準品
Calpain 2 鈣激活的中性蛋白酶2抗體硬脂酸甲酯 分析標準品,>99.5% (GC)
Calponin 1 鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體色標Standard for GC,≥99.5% (GC)
Phospho-Troponin I (Ser23/24) 磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體蒙脫土K-10 蒙脫土K-10,比表面積 240 m2/g
Calmodulin/CAM 鈣調(diào)節(jié)素抗體聚乙二單甲 平均分子量5000
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。