中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)
細(xì)胞介紹：
1957 年從成年倉(cāng)鼠的活組織切片中建立。
細(xì)胞特性：
1來(lái)源：倉(cāng)鼠卵巢
2形態(tài) ：成纖維細(xì)胞樣
3含量：>1x106個(gè)/mL
4污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5規(guī)格：T25 瓶或者 1mL凍存管包裝
細(xì)胞接受后 的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?br />中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)細(xì)胞用途：僅供科研使用。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一． 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）DMEM 培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào) 12800017，添加 NaHCO3 1.5g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二． 細(xì)胞 處理 ：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并
檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
