PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 柱式病毒RNA提取試劑盒 |
規(guī)格 | 50次 |
貨號(hào) | CP100363 |
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
豬瘟病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒96T*5/96T*2Ethyl 2-(3-cyano-isobutoxyphenyl)-methyl-thiazolecarboxylate18445
豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒96T*5/96T*2Ethyl 2-(3-cyano-hydroxyphenyl)-methyl,3-thiazole-carboxylate1617982
豬口蹄疫病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒96T*2Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-yl)methyl)amino)-nitrobenzoate1362857
弓形蟲抗原檢測(cè)試紙條卡/包,包/盒Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate1234354
貓觸珠蛋白檢測(cè)試紙條卡/包,包/盒Ethyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate9475292
豬促生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒 Tapentadol 175591-09-0 中文名: 分子式:C14H24ClNO 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
豬促生長(zhǎng)激素釋放激素(GHRH)ELISAKit Tanshinone I 中文名: 分子式:C18H12O3
豬促卵泡素elisa試劑盒 豬促卵泡素試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豬促卵泡素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豬促卵泡素試劑盒、豬促卵泡素eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Taurocholic acid 中文名:?;悄懰?/span> 分子式:C26H45NO7S 度:96.0%
豬促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒 Tapentadol 175591-09-0 中文名: 分子式:C14H24ClNO
豬促卵泡素(FSH)ELISAKit Tanshinone I 568-73-0 中文名: 分子式:C18H12O3 度:96.0% 關(guān)鍵詞: 抗腫瘤; 抗癌; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
柱式病毒RNA提取試劑盒常山乙素 HPLC≥98% 20mg 載玻片細(xì)胞CYTOCHROMEC蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
朝藿定A HPLC≥98% 20mg Humanβ2-Glycoprotein1aibodyIgA,β2-GP1AbIgAELISA試劑盒人β2糖蛋白1抗體IgA(β2-GP1AbIgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
朝藿定A HPLC≥98% 20mg 小鼠組蛋白脫乙酰基酶4(HDAC4)ELISA試劑盒 ,英文名: HDAC4 ELISA Kit
朝藿定B HPLC≥98% 20mg 山羊生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA檢測(cè)試劑盒GoatGrowthHormoneReleasingPeptide,GHRPELISAKit 96T/48T
朝藿定C HPLC≥98% 20mg 犬胰蛋白酶原激活肽(TAP)試劑盒 Canine ypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit
車葉草苷 HPLC≥98% 20mg 英文名稱Mouse8-hydroxy-2-deoxyguanosineELISAKit小鼠8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)規(guī)格:96T/48T
橙花醇 HPLC≥98% 0.1ml 草莓*培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
橙花叔醇 HPLC≥98% 0.2ml RatFractalkine/CX3CL1ELISA試劑盒大鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
橙黃Ⅰ HPLC≥98% 20mg 小鼠組蛋白脫乙?;?/span>2(HDAC2)ELISA試劑盒 ,英文名: HDAC2 ELISA Kit
橙黃Ⅱ HPLC≥98% 20mg 山羊白介素4(IL-4)ELISA檢測(cè)試劑盒GoatIerleukin4,IL-4ELISAKit 96T/48T