*代謝物(AOZ)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
一、*代謝物檢測(cè)試劑盒概要
硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性,曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用,作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長(zhǎng)的添加劑。但在長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn),硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變,正因?yàn)槿绱瞬艑?dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用。
由于硝基呋喃類藥物在體內(nèi)很快就能被代謝,而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物則能存留較長(zhǎng)的一段時(shí)間,所以在分析此類藥物的殘留時(shí)經(jīng)常要分析其代謝后的產(chǎn)物,管理部門就以檢測(cè)代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測(cè)硝基呋喃類殘留的目的。
用來(lái)檢測(cè)*代謝物的zui常用方法是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS。酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù),采用AOZ衍生物的特異性抗體,具有很高的精確度和靈敏度,較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測(cè)時(shí)間,檢測(cè)樣本量大等特點(diǎn)在檢測(cè)中很好的表現(xiàn)出來(lái)。
二、試驗(yàn)原理
*代謝物檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)一步法。在酶標(biāo)板中同時(shí)加入校準(zhǔn)品(或樣本)、酶結(jié)合物及抗體,酶標(biāo)板上包被的抗原與加入的校準(zhǔn)品(或樣本)中的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合加入的抗體,同時(shí)酶結(jié)合物與抗體結(jié)合。用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其殘留物*濃度呈負(fù)相關(guān),與校準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣本中*的含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織(雞、豬、魚、蝦等)中*代謝物的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
*代謝物…………………………………………
*代謝物…………………………………小于0.1%
呋喃它酮代謝物…………………………………小于0.1%
*代謝物…………………………………小于0.1%
*………………………………………………小于1%
呋喃它酮………………………………………………小于1%
*………………………………………………小于1%
五、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.05ppb
樣本zui低檢測(cè)限:
組織樣品檢測(cè)下限……………………………………0.1ppb
準(zhǔn)確度:
水產(chǎn)、肌肉、肝臟組織 …………………………… 80~120%
精密度:
的變異系數(shù)均小于10%
六、注意事項(xiàng)
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(20-25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、每加一種試劑前需要將其搖勻。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;也不要使用過(guò)了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過(guò)了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
6、儲(chǔ)存條件
保存試劑盒于2-8℃,不要冷凍,將不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質(zhì)的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8、在加入底物A液和底物B液后,一般顯色15min即可。若顏色較淺,可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到20min(或更長(zhǎng)),但不得超過(guò)30min。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。
七、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。