參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:樣本保存液含染料(橙黃色)
產(chǎn)品貨號:YS-P013247
產(chǎn)品規(guī)格: 2.5L
產(chǎn)品分類:PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。
人胱天蛋白酶14(P14) 奈韋拉平二磷酸腺苷核糖基化因子鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體
人胱天蛋白酶8(P8) 奈韋拉平(標(biāo)準(zhǔn)品)α增強子結(jié)合蛋白1抗體
人胱天蛋白酶4(P4) 磺甲惡唑脊髓小腦共濟失調(diào)10抗體
人胱天蛋白酶7(P7) 磺甲惡唑(標(biāo)準(zhǔn)品)蛋白激酶A錨定蛋白7抗體
人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD) 硫酸頭孢匹羅腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體12抗體
人胱天蛋白酶9(P9) 硫酸頭孢匹羅(標(biāo)準(zhǔn)品)腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體9抗體
人α1連接素(CTNNα1)阿米舒利三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白4抗體
人β1連接素(CTNNβ1)阿米舒利(標(biāo)準(zhǔn)品)肌動蛋白結(jié)合蛋白LIM3抗體
人組織蛋白酶D(CTSD) 非諾貝特酸高爾基復(fù)合體相關(guān)蛋白1抗體
人組織蛋白酶K(CTSK) 非諾貝特酸(標(biāo)準(zhǔn)品)乙酰輔酶A羧化酶1ACCα抗體
人組織蛋白酶L(CTSL) 鹽酸莫西沙星腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運蛋白1、2、3、4抗體
人尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子(CDX2)鹽酸莫西沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)去整合素樣金屬蛋白酶12
人窖蛋白(Cav-1) 昔美酸沙美特羅磷酸化乙酰輔酶A羧化酶1ACCα抗體
人CCAAT增強子結(jié)合蛋白α(C/EBPα) 萘普生膜粘連蛋白2受體抗體
人CCAAT增強子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)萘普生(標(biāo)準(zhǔn)品)晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體
人CCAAT增強子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ) 潑尼松ADCK5蛋白抗體
樣本保存液含染料(橙黃色)Bad 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體6-甲基-2-硫代尿嘧啶 分析標(biāo)準(zhǔn)品
Bad 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體六氯酮 99%
phospho-BAD(Ser128) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體六氯乙烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品
phospho-BAD(Ser75/99/118) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體1-庚烯 standard for GC, ≥99.5% (GC)
Bag1/RAP46 抑凋亡基因bag1抗體六氯苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品
Bak Bcl-2同源拮抗劑抗體六氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液,52.6mg/L,溶劑:甲
BADH2 BADH2抗體(水稻)4-羥基三苯氧 98%
Bassoon 鋅指蛋白231抗體4-羥基三苯氧 98%(Z:E=7:1)
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。