使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠羊膜胚胎細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類(lèi) | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X1358 |
商品介紹:
名稱(chēng) 小鼠羊膜胚胎細(xì)胞 2.組織來(lái)源:胎盤(pán)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠胚胎羊膜細(xì)胞分離自羊膜組織;羊膜為單層上皮細(xì)胞互相連接構(gòu)成的薄膜。單層上皮細(xì)胞具有分泌羊水的作用。隨著胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育,羊膜與絨毛密切緊貼,形成胎膜。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴(kuò)大而呈半透明的薄膜,無(wú)血管,富有韌性(胎膜也就是羊膜腔的囊壁)。羊膜腔內(nèi)充滿(mǎn)的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤(pán)的兒體面,并不深入胎盤(pán)組織中,隨著妊娠的進(jìn)展羊膜腔逐漸擴(kuò)大,占據(jù)整個(gè)子宮腔,羊膜是胎膜最內(nèi)一層,是一層半透明的薄膜,與覆蓋在胎盤(pán)、臍帶的羊膜層相連接。羊膜是胎盤(pán)的最內(nèi)層,與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細(xì)胞,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),其光滑,無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性,厚0.02~0.5mm,在電鏡下,其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為i、iii、iv、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜”而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能。 5.方法簡(jiǎn)介: ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜胚胎細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜胚胎細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M234 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi);
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2 ug pMA09-J pMA09-J 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基(含瓊脂) Silicate Bacteria Medium 250g
1瓶 R 1610細(xì)胞株 R 1610 低溫運(yùn)輸和保存
Pfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂) Pfizer Enterococcus Selective Agar 250g
10mg 肌酸二鈉鹽 Creatine Phosphate Disodium Salt -20℃保存
50T 鼻咽癌病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
1瓶 Hip
小鼠羊膜胚胎細(xì)胞細(xì)菌L型增菌液 英文名稱(chēng):Bacterial L-growing Broth 產(chǎn)品規(guī)格:65g 小鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
細(xì)菌L型分離瓊脂 英文名稱(chēng):Bacterial L-growing Agar 產(chǎn)品規(guī)格:110g 小鼠長(zhǎng)停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
溶血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠叉頭框蛋白03(FoxP3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱(chēng):Crystal violet blood agar base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠層連蛋白/板層素(LN)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
鈉瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱(chēng):NaHCO3 Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移(PAT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱(chēng):Direct selective medium-based 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠不對(duì)稱(chēng)二甲基精(ADMA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
青敏感紙片 英文名稱(chēng):Penicillin-sensitive paper 產(chǎn)品規(guī)格:20片 小鼠補(bǔ)體因子H(CFH)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
碘伏(液體) 英文名稱(chēng):Povidone-iodine (liquid) 產(chǎn)品規(guī)格:500g 小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)免疫試劑盒*直銷(xiāo)
MiddleBrook7H10瓊脂 英文名稱(chēng):MiddleBrook7H10 Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
MiddleBrook7H11瓊脂 英文名稱(chēng):Middle Brook 7H11 Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠補(bǔ)體蛋白5(C5)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝