公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產品介紹:
Bst 4.0 Basic Bead
該制品為全體系凍干微球制品,內含恒溫擴增所用的反應緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,其不包含任何染料,使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉錄),還具有依賴于DNA 的聚合酶活性,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及RT-LAMP 擴增反應的試劑。
本制品不包含任何顯色染料,可自行搭配相關染料或檢測手段進行 LAMP 反應,包括搭配 OG 染料管進行橙綠變色、搭配標記 Oligo 進行試紙條檢測、搭配熒光染料進行熒光檢測、搭配 Molecular Beacon 探針進行熒光檢測等方法。
儲存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個月。
使用方法:(進行 LAMP 橙綠變色擴增):
1. 關于 OG 橙綠變色管說明:橙綠變色染料(OG Dye)以烘干的形式預加在8聯(lián)管蓋上。LAMP反應完畢后,將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP的反應產物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見變色反應(陽性),而未擴增的 EP 管為深橙色(陰性)。本試劑管常溫長期保存。
2. 配制變色 LAMP 反應體系
在 OG 染料管(0.2ml EP)反應管中加入下述試劑
Bst4.0 Basic Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
注意:全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙
3. 反應體系配好后,置于 65°C 進行反應 15~30min。(擴增良好的引物組合,通常 20min 即可變色,一般不超過30min)。
4. 觀察結果:反應結束后,從加熱裝置中將反應管取出,室溫 2min,使整個反應管冷卻下來。再次用力將反應管
注意:
(1)觀察結果時,盡可能不要與配制反應空間共用,以防止污染操作臺。
(2)盡管 選取的為高密封
注意事項:
(1)關于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應體系后,可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部,以減少氣溶膠的污
(2)在使用其它熒光染料時,使用濃度可自行優(yōu)化,通染料可能導致擴增失敗。
(3)本試劑不支持,濁度、pH 變色、HNB 變色反應,請勿嘗試。
(4)關于 LAMP 成品試劑的建議, Bst 4.0 Basic Bead凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩(wěn)定狀態(tài),可長期保存。將擴增引物加入到 OG 橙綠變色管底部,于 70°C 烘干,再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測試劑。
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