公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產(chǎn)品介紹:
牛痘病毒-拓?fù)洚悩?gòu)酶
該 Topoisomerase I 來(lái)源于牛痘病毒(vaccinia virus),通過(guò)基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),除此外其能識(shí)別并切割雙鏈 DNA 末端 [5’C(T)CCTT↓],并且與 DNA 形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物。該共價(jià)復(fù)合物遇
到DNA 的5’-OH基團(tuán)后,重新連接形成完整 DNA 鏈。因此,使用該酶可作為 DNA 連接的有效工具,可用于 DNA 的載體連接(TOPO 克隆載體制備)、接頭連接(NGS 建庫(kù))等實(shí)驗(yàn)。
應(yīng)用
DNA-載體連接
接頭連接
儲(chǔ)存:-20°C 可保存 3 年。
TOPO 酶保存液:20mM Tris-HCl,pH7.8,150mM NaCl,
0.1% Tween20,50%甘油。
反應(yīng)實(shí)例 1(質(zhì)粒解旋)
10×TOPO Buffer 2.5 μl
超螺旋質(zhì)粒 DNA 1-20 μg
Vaccinia TOPO (5pmol/μl) 1 μl
ddH2O Up to 25 ul
37°C 孵育 5-15min。
注意:
(1)雙鏈接頭 A 通常 5’做 NH2 封閉修飾,以防止自連接;接頭 A 的 CCCTT 后通常包含 5-12bp 尾巴,再長(zhǎng)的尾巴會(huì)導(dǎo)致連接效率大幅下降;
(2)雙鏈接頭 B 的 5’端必須包含-OH。
(3)由于該酶應(yīng)用廣泛,在不同的實(shí)驗(yàn)中使用策略不同,需要靈活運(yùn)用。
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