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名稱 | 293T [HEK-293T](人胚腎細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T; 293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo |
種屬 | 人 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
注意事項(xiàng) | 該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象，請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。 |
背景描述 | 293T細(xì)胞是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。 |
年齡（性別） | 胚胎 |
組織來(lái)源 | 腎 |
細(xì)胞類型 | 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系 |
生物安全等級(jí) | 1 |
倍增時(shí)間 | ~24-30 hours |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635 |
細(xì)胞傳代：
1. HEK-293（293）人胚腎細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
磷suan化蛋白激meiC mu型封閉多肽 | 球孢子菌通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
溫和氣單胞菌PCR試劑盒 | 淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2ELISA試劑盒 |
人β2整合su(ITG β2/CD11+CD18)ELISA試劑盒 | 蛋白基因產(chǎn)物9.5ELISA試劑盒 |
人補(bǔ)體因子H(CFH)試劑盒ELISA | 親環(huán)suDELISA試劑盒 |
人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 蛋白 |
人端粒保護(hù)蛋白1(POT1)ELISA試劑盒 | 白介su受體相關(guān)激meiELISA試劑盒 |
雙皮質(zhì)su封閉多肽 | 沙門氏菌SPP-spec核suan檢測(cè)試劑盒 |
甲硝血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物 | 普氏立克次體PCR檢測(cè)試劑盒 |
CDK5激活結(jié)合蛋白1封閉多肽 | 布氏桿菌(BS)核suan檢測(cè)試劑盒 |
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5封閉多肽 | 脊髓灰質(zhì)炎病毒2型PCR檢測(cè)試劑盒 |
c-mer原癌基因酪氨suan激mei封閉多肽 | 馬泰勒梨形蟲(原)PCR試劑盒 |
卵透明帶糖蛋白2封閉多肽 | HEK-293（293）人胚腎細(xì)胞禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
透明帶黏附蛋白ZAN封閉多肽 | 前病毒PCR試劑盒 |
同源盒蛋白HOXD10封閉多肽 | 馬隱秘桿菌PCR試劑盒 |
磷suan化磷脂酰肌醇激meiPIK3-γ封閉多肽 | 馬泰勒梨形蟲(原)PCR試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
