細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
名稱(chēng) | LNCaP clone FGC (人前列腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
別稱(chēng) | LNCaP-Clone-FGC; LNCaP.FGC; LNCaP-FGC; LNCaP FGC; LNCaP-ATCC |
種屬 | 人類(lèi) |
年齡（性別） | 男性，50歲 |
組織來(lái)源 | 前列腺；左鎖骨淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | 人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。LNCaP clone FGC細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時(shí)可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。LNCaP clone FGC細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細(xì)胞生長(zhǎng)極其緩慢，傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)LNCaP clone FGC細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24-48小時(shí)，以使細(xì)胞再貼壁。此后，可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中。 |
生物安全等級(jí) | 1 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時(shí)間 | ~32-36小時(shí) |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
致瘤性 | Yes, in soft agar.Yes, the cells are tumorigenic in nude mice. |
受體表達(dá)情況 | androgen receptor, positive;estrogen receptor, positive |
基因表達(dá)情況 | human prostatic acid phosphatase; prostate specific antigen |
注意事項(xiàng) | （1）這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落。傳代時(shí)如消化后細(xì)胞形成聚團(tuán)，可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。 （2）該細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。生長(zhǎng)很慢。傳代后 48 小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。需使用 Corning 的 cellbind 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，貨號(hào)是 3289；或者使用多聚賴(lài)氨酸 包被過(guò)的培養(yǎng)皿。 （3）在細(xì)胞運(yùn)輸途中，多數(shù)細(xì)胞會(huì)從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng) 24-48 小時(shí)，以使細(xì)胞再貼壁。此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。 |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-1740 BCRC; 60088 BCRJ; 0149 ECACC; 89110211 |
細(xì)胞傳代：
1. 試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來(lái)為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開(kāi)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無(wú)菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開(kāi)始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過(guò)的器械要冷卻后才能使用；已吸過(guò)培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過(guò)火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過(guò)早開(kāi)瓶，開(kāi)瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過(guò)早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來(lái)自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專(zhuān)管專(zhuān)用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來(lái)的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
Ninein樣蛋白封閉多肽 | 雞減蛋綜合征病毒1976PCR檢測(cè)試劑盒 |
梅毒螺旋體(蒼白密螺旋體)PCR試劑盒 | 鱷失調(diào)蛋白ELISA試劑盒 |
人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A) ELISA試劑盒 | 動(dòng)力蛋白激活蛋白3ELISA試劑盒 |
人白介su12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)ELISA檢測(cè)試劑盒 | DEAD框肽5ELISA試劑盒 |
人A(VA)elisa試劑盒 | γELISA試劑盒 |
人程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)試劑盒ELISA | UV切除修復(fù)蛋白R(shí)AD23同源物AELISA試劑盒 |
UL16結(jié)合蛋白2封閉多肽 | 病毒H/H/H亞型(AIV-H/H/H)核suan檢測(cè)試劑盒 |
酪氨suan蛋白激mei受體B2封閉多肽 | 牛細(xì)小病毒PCR試劑盒 |
Cullin 4a蛋白封閉多肽 | 鯊魚(yú)源性成分（Shark）核suan檢測(cè)試劑盒 |
中心體蛋白27封閉多肽 | 耐PCR檢測(cè)試劑盒 |
C末端結(jié)合蛋白2封閉多肽 | 蜜蜂微孢子蟲(chóng)通用PCR試劑盒 |
腫瘤壞死因子受體超家族成員19L封閉多肽 | LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞諾氏瘧原蟲(chóng)PCR試劑盒 |
重組人CD3E蛋白 | 瘧原蟲(chóng)通用PCR試劑盒 |
富含重復(fù)蛋白Q4封閉多肽 | 蜜蜂球囊菌PCR試劑盒 |
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白15封閉多肽 | 蜜蜂微孢子蟲(chóng)通用PCR檢測(cè)試劑盒 |
