使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供最新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
分類 | 原代細(xì)胞 |
貨號(hào) | GOY-01X1310 |
商品介紹:
名稱 小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞 2.組織來(lái)源:脊髓組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自脊髓組織;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù);是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來(lái)處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對(duì)的神經(jīng),分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓神經(jīng)纖維組成;脊髓是許多簡(jiǎn)單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,也是許多簡(jiǎn)單反射活動(dòng)的低級(jí)中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),31對(duì)脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,即神經(jīng)細(xì)胞,其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹(shù)突、軸突。胞體又叫核周體,內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個(gè)有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍(lán)色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹(shù)突和軸突是神經(jīng)元的突起,能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動(dòng),突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。 5.方法簡(jiǎn)介: ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞采用消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): ()實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-M212 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
XLD培養(yǎng)基平板(9cm) Xylose Lysine Desoxycholate Medium 10個(gè)/包
2 ug pDsRed-Monomer-N1 pDsRed-Monomer-N1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
500mL Phospho-Protein Extraction Buffer II Phospho-Protein Extraction Buffer II 常溫保存
250g 干粉型TB培養(yǎng)基 TB Medium Powder 常溫
2 ug pPAmCherry-Tubulin pP?嵌?L?
小鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞麥芽浸膏湯 英文名稱:Malt Extract Broth 產(chǎn)品規(guī)格:200g 小鼠鐵調(diào)素(Hepc)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
酵母粉葡萄糖氯瓊脂(YDC) 英文名稱:Yeast Extract Dextrose Chloramphenicol Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠鐵蛋白(FE)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
Candida Elective瓊脂 英文名稱:Candida Elective Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠天門冬氨基轉(zhuǎn)移(AST)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
DTM培養(yǎng)基 英文名稱:DTM Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖原化同工MM(GP-MM)免疫試劑盒*直銷
DRBC瓊脂 英文名稱:DRBC Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖原化同工II(GP-II)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
WORT瓊脂 英文名稱:Wort Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖原化同工BB(GP-BB)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
WORT肉湯 英文名稱:Wort Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖原合成激(GSK)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
YGC瓊脂 英文名稱:YGC Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)免疫試劑盒*直銷
改良綠色酵母菌和真菌肉湯 英文名稱:m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
Littman瓊脂 英文名稱:Littman Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝