組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013494 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
大鼠Apelin蛋白(APLN)嘧霉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)外質(zhì)蛋白FRAS1抗體
大鼠組織蛋白酶B(CTSB)甜菜寧(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)富馬酸水合酶抗體
大鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)成纖維生長因子21抗體
大鼠免疫球蛋白G2b(IgG2b)氯草定(標(biāo)準(zhǔn)品)核仁纖維蛋白抗體
大鼠免疫球蛋白G2c(IgG2c)溴磷(標(biāo)準(zhǔn)品)鐵蛋白輕鏈抗體
大鼠質(zhì)金屬蛋白酶11(MMP-11)吡(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%)肝核因子3抗體
大鼠表皮調(diào)節(jié)素(EREG)(0.105mg/ml)果糖1，6-二磷酸酯酶抗體
大鼠α1抗胰蛋白酶(α1-AT)(10μg/ml,u=6～5%,酮)6磷酸果糖激酶抗體
大鼠質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)敵稗標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)肌肉果糖二磷酸酶抗體
大鼠免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23) 伏殺硫磷(標(biāo)準(zhǔn)品)纖維蛋白原γ鏈抗體
大鼠白介素34(IL-34)伏殺硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7～3%,酮)纖維蛋白肽B抗體（血纖肽B）
大鼠磷酸烯式酮酸羧激酶1(PCK1)克螨特標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml)原癌因c FGR抗體
大鼠平滑肌肌動(dòng)蛋白α2(ACTα2)三氯殺蟲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體
大鼠白介素18結(jié)合蛋白(IL18BP)三氯殺蟲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)磷酸化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體
大鼠硬骨素(SOST)霜霉威(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)纖連蛋白2抗體
大鼠叉頭框蛋白P3(FOXP3)多氯聯(lián)(Aroclor 1248)標(biāo)樣(100μg/mL,體:)纖連蛋白7抗體
沙門氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒SEK1/MKK4 絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體N-順二酰亞 99%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser80) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體N-順二酰亞 超純級，99.5%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二雙（2-氨）四酸 AR
Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二四酸三鹽 98%
Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體二四酸三鹽 99%
MEK6 絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體N--N-（3-磺）-3-鈉鹽 98%
Phospho-MEK6 (Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體二四酸二鈉,二水 AR，98%
Phospho-MEK6 (Ser202) 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK6抗體二四酸二鈉,二水 色譜級，≥99.0%
