適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:紫河車LAMP鑒定試劑盒供應(yīng)商
英文名稱:Placenta hominis
貨號(hào):YSP9475
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、腦膜炎敗血金黃桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、腦膜炎敗血金黃桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
?
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
ANG- II (Human angioension II ) ELISA Ki 人血管緊張素Ⅱ化汞 ACS(劇品)三羥基烷 98%Ehrlichiae spp.
ANG- I R(Human angioension I recepor Anibody) ELISA Ki 人血管緊張素Ⅰ受體抗體化汞 AR,99.5%(劇品)6-姜烯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥90%Eikenella corrodens
Ang- I ELISA Ki 大鼠血管緊張素Ⅰ化汞 CP,99.0%(劇品)8-姜酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥95%Eimeria spp.
Ang- I (Mouse angioension I ) ELISA Ki 小鼠血管緊張素Ⅰ酸汞 AR,98.5%(劇品)10-姜酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥96%Elaeophora schneideri
ANG ELISA Ki 大鼠血管生長(zhǎng)素酸汞 CP,98.0%(劇品)10-姜酚 95%Emmonsia parva
ANF(Human arial nariureic facor) ELISA Ki 人心納素酸汞 GR,99.0%(劇品)6-姜酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%Encephaliozoon spp.
androgen ElISA Ki 大鼠雄激素紅色 AR,99.5%(劇品)染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)Enamoeba hisolyica
ANA(Human ani-nucleolus anibody) ELISA Ki 人抗核仁抗體黃色 AR,99.5%(劇品)番瀉苷C 99%Enamoeba spp.
ANA(Human Ani-nuclear Anibody) ELISA Ki 人抗核抗體酸汞 AR,98.0%(劇品)鉿粒 99.9% meals basis,1-10mmEneric Adenovirus41
ANA(Human ani-neurophil anibody) ELISA Ki 人抗中性粒細(xì)胞抗體 AR,99.5%(劇品)鈮粉 99.5%,200目Enerinvasive E.coli(EIEC)
紫河車LAMP鑒定試劑盒供應(yīng)商Mouse Anpep(Aminopepidase N) ELISA Ki培養(yǎng)基Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Ndnf(Proein NDNF) ELISA Ki木糖發(fā)酵管Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Kap(Kidney androgen-regulaed proein) ELISA Ki鼠李糖發(fā)酵管Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse IGFBP-7(Insulin-like growh facor-binding proein 7) ELISA KiFraser 肉湯增菌液基礎(chǔ)Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Prnp(Major prion proein) ELISA Ki吖啶黃Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Gypa(Glycophorin-A) ELISA Ki萘啶酮酸Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Klk1b22(Kallikrein 1-relaed pepidase b22) ELISA Ki檸檬酸鐵銨溶液Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Nfkb2(Nuclear facor NF-kappa-B p100 subuni) ELISA Ki吖啶黃Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse B4gal1(Bea-1,4-galacosylransferase 1) ELISA Ki萘啶酮酸Sandwich ELISA, Double Anibody
Mouse Crry(Complemen regulaory proein Crry) ELISA Ki李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基Sandwich ELISA, Double Anibody